privind aprobarea Normei sanitare veterinare şi pentru siguranţa alimentelor ce stabileşte cerinţe pentru determinarea nivelurilor de dioxina şi a compusilor policlordifenili (PCB) asemanatori dioxinei din furaje
În temeiul art. 10 lit. b) din Ordonanţa Guvernului nr. 42/2004 privind organizarea activităţii sanitar-veterinare şi pentru siguranţa alimentelor, aprobată şi modificată prin Legea nr. 215/2004,vazand Referatul de aprobare nr. 23.470 din 15 noiembrie 2004, întocmit de Direcţia generală sanitară veterinara din structura Autorităţii Naţionale Sanitare Veterinare şi pentru Siguranţa Alimentelor,preşedintele Autorităţii Naţionale Sanitare Veterinare şi pentru Siguranţa Alimentelor emite următorul ordin: +
Articolul 1Se aprobă Norma sanitară veterinara şi pentru siguranţa alimentelor ce stabileşte cerinţe pentru determinarea nivelurilor de dioxina şi a compusilor policlordifenili (PCB) asemanatori dioxinei din furaje, prevăzută în anexa care face parte integrantă din prezentul ordin. +
Articolul 2Autoritatea Naţionala Sanitară Veterinara şi pentru Siguranţa Alimentelor, institutele veterinare centrale şi direcţiile sanitare veterinare şi pentru siguranţa alimentelor judeţene şi a municipiului Bucureşti vor duce la îndeplinire prevederile prezentului ordin. +
Articolul 3Prezentul ordin constituie transpunerea oficială a Directivei Comisiei 2002/70/CE ce stabileşte cerinţe pentru determinarea nivelurilor de dioxine şi PCB asemanatori dioxinei din furaje, publicată în Jurnalul Oficial al Comunităţilor Europene (JOCE) nr. L 209 din 6 august 2002, pag. 0015-0021. +
Articolul 4Prezentul ordin va fi publicat în Monitorul Oficial al României, Partea I, şi va intra în vigoare la 5 zile de la publicare.p. Preşedintele Autorităţii NaţionaleSanitare Veterinare şi pentruSiguranţa Alimentelor,Gabriel Vasile DraganBucureşti, 17 noiembrie 2004.Nr. 109. +
Anexa NORMA SANITARĂ VETERINARA ŞI PENTRU SIGURANTA ALIMENTELORce stabileşte cerinţe pentru determinarea nivelurilor de dioxina şi a compusilor policlordifenili (PCB) asemanatori dioxinei din furaje +
Articolul 1Autoritatea Naţionala Sanitară Veterinara şi pentru Siguranţa Alimentelor trebuie să se asigure ca prelevarea de probe pentru controlul oficial al nivelurilor de dioxine şi furani şi pentru determinarea nivelurilor de compuşi policlordifenili asemanatori dioxinei din furaje, este efectuată în conformitate cu metodele descrise la anexa nr. 1. +
Articolul 2Autoritatea Naţionala Sanitară Veterinara şi pentru Siguranţa Alimentelor trebuie să se asigure ca prepararea probei şi metodele de analiza utilizate pentru controlul oficial al nivelurilor de dioxine şi furani şi determinarea nivelurilor de compuşi policlordifenili asemanatori dioxinei în furaje sunt conforme cu criteriile descrise la anexa nr. 2. +
Articolul 3(1) Autoritatea Naţionala Sanitară Veterinara şi pentru Siguranţa Alimentelor, poate pune în aplicare acte normative, reglementări şi prevederi administrative, necesare pentru conformarea cu prezenta norma sanitară veterinara şi pentru siguranţa alimentelor, le va transmite Comisiei Europene, prin intermediul Ministerului Integrării Europene şi Misiunii României pe lângă Uniunea Europeană, împreună cu tabelele de concordanta, în vederea evaluării conformitatii transpunerii legislative şi va stabili măsurile necesare pentru implementarea corecta şi la timp a prevederilor prezentei norme sanitare veterinare şi pentru siguranţa alimentelor. … (2) Atunci când Autoritatea Naţionala Sanitară Veterinara şi pentru Siguranţa Alimentelor adopta cele menţionate la alin. 1, trebuie să facă o referire expresă la prezenta norma sanitară veterinara şi pentru siguranţa alimentelor la publicarea oficială a acesteia. Procedura privind realizarea referirii menţionate rămâne în responsabilitatea Autorităţii Naţionale Sanitare Veterinare şi pentru Siguranţa Alimentelor. … (3) Autoritatea Naţionala Sanitară Veterinara şi pentru Siguranţa Alimentelor va lua măsurile necesare şi va sanctiona, potrivit legii, orice încălcare a prevederilor prezentei norme sanitare veterinare şi pentru siguranţa alimentelor. De asemenea, va facilita întocmirea documentelor necesare pentru sancţionarea încălcării legislaţiei veterinare şi pentru siguranţa alimentelor ce constituie infracţiuni. … (4) Prezenta norma sanitară veterinara şi pentru siguranţa alimentelor constituie transpunerea oficială a Directivei Comisiei 2002/70/CE . … +
Articolul 4Anexele nr. 1 şi 2 fac parte integrantă din prezenta norma sanitară veterinara şi pentru siguranţa alimentelor. +
Anexa 1la norma sanitară veterinara şi pentru siguranţa alimentelorMETODE DE PRELEVARE DE PROBE PENTRU CONTROLUL OFICIAL AL NIVELURILORDE DIOXINE (PCDD/PCDF) ŞI DETERMINAREA COMPUSILOR POLICLORDIFENILI PCBsASEMANATORI DIOXINEI DIN ANUMITE FURAJE1. Scop şi aplicabilitateProbele destinate controlului oficial al nivelurilor conţinutului de dioxine (PCDD/PCDF), precum şi determinarea conţinutului de compuşi policlordifenili asemanatori dioxinei din furaje, trebuie să fie prelevate în conformitate cu prevederile "Normei sanitare veterinare şi pentru siguranţa alimentelor ce stabileşte metode naţionale de prelevare de probe pentru controlul oficial al furajelor". Probele globale astfel obţinute trebuie să fie considerate ca reprezentative pentru loturile sau subloturile din care acestea sunt prelevate. Conformitatea cu nivelurile maxime stabilite de "Norma sanitară veterinara privind limitele maxime admise pentru unele substanţe şi produse în furaje", aprobată prin Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 294/11.07.2002, publicat în Monitorul Oficial al României, Partea I, nr. 731/7.10.2002 trebuie să fie stabilită pe baza nivelurilor determinate în probele de laborator.2. Conformitatea lotului sau a sublotului cu specificaţiileLaboratorul de control trebuie să analizeze proba de laborator şi contraproba, prin analiza dubla, în cazul în care rezultatul obţinut la prima analiza este diferit cu cel puţin 20%, fie inferior, fie superior faţă de nivelul maxim determinat iniţial iar apoi se calculează media rezultatelor. Lotul este acceptat dacă rezultatul primei analize este cu mai puţin de 20% sub nivelul maxim stabilit iniţial sau atunci când este necesară analiza dubla, dacă media este în conformitate cu nivelul maxim respectiv, stabilit de "Norma sanitară veterinara privind limitele maxime admise pentru unele substanţe şi produse în furaje".1) Tabel al WHO – TEFs pentru evaluarea riscului public bazat pe concluziile intalnirii Organizaţiei Mondiale a Sănătăţii de la Stockholm, Suedia, din 15-18 iunie 1997 (Van den Berg şi col., (1998) Factori de Echivalenta Toxica (TEFs) pentru PCBs, PCDDs, PCDFs pentru oameni, pentru animale şi pentru vietuitoare. Perspective de Sănătate a Mediului, 106(12), 775).────────────────────────────────┬───────────────────────────────────────────────Dibenzo-p-dioxine │Compuşi PCB (policlorodifenili) + Mono-orto PCB(PCDDs) │asemanatori dioxinei │2,3,7,8-TCDD 1 │Non-orto PCBs1,2,3,7,8-PeCDD 1 │ │PCB 77 0,00011,2,3,4,7,8-HxCDD 0,1 │1,2,3,6,7,8-HxCDD 0,1 │PCB 81 0,00011,2,3,7,8,9-HxCDD 0,1 │PCB 126 0,11,2,3,4,6,7,8-HpCDD 0,01 │PCB 169 0,01OCDD 0,0001 │Dibenzofurani (PCDFs) │Mono-orto PCBs2,3,7,8-TCDF 0,1 │ │PCB 105 0,00011,2,3,7,8-PeCDF 0,05 │ │PCB 114 0,00052,3,4,7,8-PeCDF 0,5 │1,2,3,4,7,8-HxCDF 0,1 │PCB 118 0,00011,2,3,6,7,8-HxCDF 0,1 │PCB 123 0,00011,2,3,7,8,9-HxCDF 0,1 │ │PCB 156 0,00052,3,4,6,7,8-HxCDF 0,1 │ │PCB 157 0,00051,2,3,4,6,7,8-HpCDF 0,01 │1,2,3,4,7,8,9-HpCDF 0,01 │PCB 167 0,00001OCDF 0,0001 │PCB 189 0,0001────────────────────────────────┴───────────────────────────────────────────────Abrevieri utilizate: T = tetra; Pe = penta; Hx = hexa; Hp = hepta; O = octo; CDD = clorodibenzodioxina: CDF = clorodibenzofuran; CB = clorodifenil. +
Anexa 2la norma sanitară veterinara şi pentru siguranţa alimentelorPREPARAREA PROBELOR ŞI CERINŢE PENTRU METODELE DE ANALIZAUTILIZATE PENTRU CONTROLUL OFICIAL AL NIVELURILOR DE DIOXINE (PCDD/PCDF)ŞI DETERMINAREA COMPUSILOR POLICLORDIFENILI (PCBs) ASEMANATORIDIOXINEI DIN ANUMITE FURAJE1. Obiective şi domeniu de aplicareAceste cerinţe trebuie să fie aplicate atunci când materiile furajere şi furajele sunt analizate pentru determinarea nivelurilor de dioxine (dibenzo-p-dioxine policlorurate (PCDD) şi dibenzofurani policlorurati (PCDF) şi pentru determinarea compusilor policlorodifenili (PCBs) asemanatori dioxinei.Monitorizarea pentru prezenta dioxinelor în furaje poate fi efectuată printr-o strategie ce implica o metoda de screening, cu scopul de a selecta acele probe cu niveluri de dioxine şi compuşi policlorodifenili asemanatori dioxinei (PCBs) ce au valori diferite cu 30-40%, fie inferioare, fie superioare nivelului de interes. Concentraţia de dioxine din acele probe cu niveluri semnificative trebuie să fie determinata/confirmată printr-o metoda de confirmare.Metodele de screening sunt metode ce sunt utilizate pentru a detecta prezenta compusilor policlorodifenili (PCBs) asemanatori dioxinei la nivelul de interes. Aceste metode au o capacitate mare de examinare a probelor şi sunt utilizate pentru a detecta un număr mare de probe ca fiind potenţial pozitive. Acestea sunt special desemnate pentru a se evita rezultate fals negative.Metodele de confirmare sunt metode ce furnizează informaţii complete sau complementare ce permit ca dioxinele şi compusii policlordifenili asemanatori dioxinelor să fie clar identificati şi cuantificati la nivelul de interes.2. Date de referinţaDeoarece probele de mediu şi probele biologice (ce includ probe de materii furajere/furaje), conţin, în general, amestecuri complexe de diferiţi congeneri de dioxina, a fost elaborat conceptul de Factori de Echivalenta Toxica (TEFs), pentru a se facilita evaluarea riscului. Aceşti TEFs au fost stabiliţi pentru a se exprima concentratiile de amestecuri de PCCDs şi de substituenti PCDFs 2,3,7,8 şi mai recent, a unor substituenti non-orto şi mono-orto clor de PCB ce poseda în echivalenti toxici, activitate asemănătoare dioxinei, (TEQs) de 2,3,7,8,-TCDD (vezi anexa nr. 1, nota de subsol 1).Concentratiile substanţelor individuale într-o proba data sunt multiplicate prin valoarea TEF respectiva a acestora şi apoi insumate, pentru a se obţine concentraţia totală a compusilor asemanatori dioxinei, exprimată ca TEQs.Conceptul de "limita superioară" necesita utilizarea limitei de cuantificare pentru participarea la TEQ a fiecărui congener necuantificat.Conceptul de "limita inferioară" necesita utilizarea valorii zero pentru participarea la TEQ a fiecărui congener necuantificat.Conceptul de "limita medie" necesita utilizarea jumătăţii limitei de cuantificare, calculand contribuţia la TEQ a fiecărui congener necuantificat.3. Cerinţe de asigurare a calităţii ce trebuie să fie respectate pentru prepararea probeiÎn plus faţă de cele prezentate anterior, probele trebuie să fie conforme cu următoarele cerinţe:(a) probele trebuie să fie depozitate şi transportate în containere din sticlă, aluminiu, polipropilena sau polietilena. Trebuie să fie indepartate urmele resturilor de hârtie de pe containerul cu proba. Sticlaria trebuie să fie spalata cu solventi în prealabil controlati în vederea detectarii dioxinelor.(b) să se realizeze o analiza martor prin efectuarea întregii proceduri analitice, omitandu-se doar proba.(c) greutatea probei utilizate pentru extracţie trebuie să fie suficienta, pentru a se întruni cerinţele în ceea ce priveşte sensitivitatea.4. Cerinţe pentru laboratoare(a) Laboratoarele trebuie să demonstreze performanta metodei în zona nivelului de interes (ex. 0,5x, 1x, şi 2x nivelul de interes), cu un coeficient acceptabil de variatie pentru analiza repetată. Pentru detalii ale criteriilor de acceptare vezi punctul 5.(b) Limita cuantificării pentru o metoda de confirmare trebuie să fie într-un interval de aproximativ o cincime din nivelul de interes (limita), pentru a fi siguri ca, în fapt, coeficienţi de variatie acceptabili sunt intalniti în zona nivelului de interes (limita).(c) Trebuie să fie efectuate controale oarbe regulate ale martorului şi ale experimentelor susţinute sau analiza pe probe de control (preferabil, dacă este disponibil, pe material de referinţa certificat), ca măsuri interne de control al calităţii.(d) Cea mai buna cale pentru a se demonstra competenţa în efectuarea analizelor specifice este participarea cu succes la studii inter-laboratoare ce evalueaza experienta laboratorului. Totuşi, participarea cu succes la studiile inter-laboratoare (de ex. pentru probe de sol sau probe de apa uzata ce prezintă niveluri de contaminare inferioare) este necesară pentru a se dovedi competenţa, de asemenea, în domeniul probelor de furaje şi de alimente. De aceea, este obligatorie participarea continua la studiile inter-laboratoare pentru determinarea dioxinelor şi a compusilor policlorodifenili asemanatori dioxinei cu privire la matricele relevante de alimente şi furaje.Laboratoarele trebuie să fie acreditate de un organism recunoscut în conformitate cu ghidul ISO 58, pentru a se asigura ca acestea aplica proceduri analitice de asigurare a calităţii. Laboratoarele trebuie să fie acreditate urmând standardul ISO/IEC/17025:1999 standard.5. Cerinţe ce trebuie să fie îndeplinite de procedura analitica pentru dioxine şi compuşi policlorodifenili asemanatori dioxinelorCerinţe fundamentale pentru acceptarea procedurilor analitice:(a) Sensitivitate înaltă şi limite reduse de detectie. Pentru PCDDs şi PCDFs, cantităţile detectabile trebuie să fie de ordinul picogramelor TEQ (10-12 g) din cauza toxicitatii extreme a unor compuşi. Este cunoscut faptul ca, de regula, compusii policlorodifenili asemanatori dioxinelor apar la niveluri mai mari decât PCDDs şi PCDFs. Pentru cei mai mulţi congeneri ai compusilor policlorodifenili asemanatori dioxinelor sensitivitatea este deja de ordinul nanogramelor (10-9 g). Totuşi, pentru măsurarea mai multor congeneri toxici ai compusilor policlorodifenili asemanatori dioxinelor (în special congeneri non-orto substituiti), trebuie să fie atinsa aceeaşi sensitivitate ca şi pentru PCDDs şi PCDFs.(b) Selectivitate înaltă (specificitate). Este necesară o distincţie a compusilor PCDDs, PCDFs şi a compusilor policlorodifenili asemanatori dioxinelor, dintr-o multitudine de alţi compuşi coextrasi şi posibili compusii de interferenta prezenţi la concentratii de până la câteva ordine de mărime mai mari decât cele ale substanţelor analizate luate în consideraţie. Pentru metodele de gaz – cromatografie/spectrometrie de masa (GC-MS) este necesară o diferentiere între diferiţi congeneri, precum şi între compusii toxici (de ex. 17 PCCDs 2,3,7,8 substituit şi PCDFs şi compuşi policlorodifenili asemanatori dioxinei) ori alţi congeneri. Biotestele trebuie să permită determinarea selectiva a valorilor TEQ, ca suma a PCDDs, PCDFs şi a compusilor policlorodifenili asemanatori dioxinei.(c) Înaltă acuratete (fidelitate şi precizie). Determinarea trebuie să furnizeze o estimare valida a concentratiei reale a unei probe. O înaltă acuratete (acuratetea masuratorii: fidelitatea gradului de concordanta între rezultatul unei măsurători cu o valoare reală sau atribuită a masuratorii) este necesară, pentru a se evita respingerea rezultatului analizei unei probe, ca urmare a unui deficit de fiabilitate a TEQ estimat. Acuratetea este exprimată ca fidelitate (diferenţa între valoarea medie masurata pentru o substanţa de analizat dintr-un material certificat şi valoarea certificată a acestuia, exprimată ca procentaj din aceasta valoare) şi precizie (precizia este, în mod obişnuit, calculată ca o deviatie standard ce include repetabilitatea şi reproductibilitatea şi indica gradul de concordanta între rezultatele obţinute prin aplicarea repetată a procedurii experimentale în condiţii determinate). Metodele de screening pot cuprinde bioteste şi metode GC-MS. Ca metode de confirmare sunt: metodele de gaz – cromatografie de înaltă rezoluţie şi/sau spectrofotometrie de masa de înaltă rezoluţie (HRGC/HRMS). Trebuie să fie respectate următoarele criterii privind valoarea totală a TEQ.┌───────────────────────┬──────────────────────────┬───────────────────────────┐│ │ Metode de screening │ Metode de confirmare │├───────────────────────┼──────────────────────────┼───────────────────────────┤│Rata de fals negative │ <1% │ │├───────────────────────┼──────────────────────────┼───────────────────────────┤│Fidelitate │ │ -20% – +20% │├───────────────────────┼──────────────────────────┼───────────────────────────┤│CV │ <30% │ <15% │└───────────────────────┴──────────────────────────┴───────────────────────────┘6. Cerinţe specifice pentru metode de GC/MS ce trebuie să fie respectate în scop de confirmare sau de screening(a) Adăugarea de standarde interne de substituent PCDD/F de clor-2,3,7,8 marcate C^13 (şi de standarde interne ale compusilor policlorodifenili (PCB) asemanatori dioxinei, marcati C^13 dacă trebuie să fie determinati compuşi policlorodifenili (PCB) asemanatori dioxinei) trebuie să fie efectuată la debutul metodei de analiza (ex. anterior extractiei), pentru a se valida procedura analitica. Trebuie să fie adăugat cel puţin un congener pentru fiecare din grupele clorurate izomere de la tetra la octo de PCDD/F (şi cel puţin un congener pentru fiecare din grupele izomere de compuşi policlorodifenili asemanatori dioxinei, dacă aceştia trebuie să fie determinati) şi alternativ cel puţin un congener pentru fiecare funcţie de înregistrare a ionului selecţionat prin spectrometrie de masa (utilizat pentru monitorizarea PCDD/F şi a compusilor policlorodifenili asemanatori dioxinei). Exista, cu siguranţa, o preferinta clara, în cazul metodelor de confirmare, de utilizare a tuturor standardelor interne de substituenti PCDD/F 2,3,7,8 marcate C^13 şi a tuturor standardelor interne ale compusilor policlorodifenili asemanatori dioxinei marcate C13 (dacă trebuie să fie determinati compusii policlorodifenili asemanatori dioxinei).Trebuie să fie determinati, de asemenea, factorii de răspuns relativ pentru acei congeneri pentru care nu este adăugat nici un analog marcat C^13, prin utilizarea soluţiilor de etalonare corespunzătoare.(b) Pentru alimente de origine vegetala şi alimente de origine animala ce conţin mai puţin de 10% grasime, adăugarea de standarde interne este obligatorie anterior extractiei. Pentru alimente de origine vegetala ce conţin mai mult de 10% grasime, standardele pot fi adăugate, fiecare, înaintea extractiei sau după extractia grasimii. Trebuie să fie efectuată o validare corespunzătoare a eficientei extractiei, în funcţie de stadiul la care standardele interne sunt introduse, dacă rezultatele sunt raportate pe baza produsului sau grasimii.(c) Anterior metodei de analiza GC/MS, trebuie să fie adăugat unul sau doua standarde de recuperare (substitutie).(d) Este necesar controlul recuperării. Pentru metodele de confirmare, recuperarile de standarde interne individuale trebuie să fie într-o gama de valori cuprinsă între 60% şi 120%. Pentru congeneri individuali, în special pentru unele dibenzodioxine şi dibenzofurani hepta şi octo clorurate, sunt acceptabile recuperari inferioare sau superioare, cu condiţia ca, în fapt, participarea acestora la valoarea TEQ sa nu depăşească 10% din totalul valorii TEQ (bazat doar pe PCDD/F). Pentru metode de screening, recuperarea trebuie să fie situata în limitele de 30%-140%.Separarea dioxinelor de compusii clorurati interferenti, ca de exemplu compusii policlorodifenili asemanatori dioxinei şi difenileterii clorurati, trebuie să fie efectuată prin tehnici cromatografice corespunzătoare (de preferinta pe o coloana de florisil, alumina şi/sau cărbune).(e) Separarea izomerilor prin cromatografie în faza gazoasa trebuie să fie suficienta (mai puţin de 25% de la pic la pic între 1,2,3,4,7,8-XxCDF şi 1,2,3,6,7,8-XxCDF)(f) Determinarea trebuie să fie efectuată în conformitate cu Metoda EPA 1613 revizuire B: "Dioxine şi furani tetra-octo clorurati prin metoda de dilutie a izotopilor, HRGC/HRMS sau alta metoda cu criterii echivalente de performanţă".Diferenţa între limita superioară şi limita inferioară nu trebuie să depăşească 20% pentru alimente cu o contaminare în dioxine de aproximativ 1 pg OMS-TEQ/g grasime (bazată numai pe PCCD/PCDF). Pentru alimente cu un conţinut scăzut de grasime, trebuie să se aplice aceleaşi cerinţe ca şi pentru niveluri de contaminare de aproximativ 1 pg OMS-TEQ/g produs. Pentru niveluri de contaminare inferioare (de ex. 0,50 pg OMS-TEQ/g produs) diferenţa între nivelul superior şi nivelul inferior poate fi într-o gama de valori cuprinsă între 20-40%.7. Metode de analiza de screening7.1. IntroducerePot fi efectuate diferite abordari analitice, utilizând o metoda de screening: o abordare pura pentru screening şi o abordare cantitativă.Abordare pentru screeningRăspunsul probelor este comparat cu cel al unei probe de referinţa, la nivelul de interes (limita). Probele cu un răspuns inferior celui de referinţa sunt declarate negative, cele cu un răspuns superior sunt presupuse pozitive. Cerinţe:(a) În fiecare serie de testări trebuie să fie incluse un martor şi o proba de referinţa ce trebuie să fie extrasa şi testata în acelaşi timp şi în condiţii identice. Răspunsul probei de referinţa trebuie să fie crescut în comparatie cu al unui martor.(b) Trebuie să fie incluse probele de referinţa suplimentare, (într-o gama de concentratii de 0,5x şi 2x nivelul de interes (limita), pentru a se demonstra performanta proprie a testului, în vederea controlului nivelului considerat.(c) Atunci când se testeaza alte matrice, trebuie să fie demonstrata aplicabilitatea probei(lor) de referinţa, de preferinta prin includerea probelor menţionate la metoda HRGC/HRMS, pentru a conţine un nivel TEQ aproape de cel al probei de referinţa sau al unui martor îmbogăţit la acest nivel.(d) Din moment ce nici un standard intern nu poate fi utilizat în bioteste, testele cu privire la repetabilitate sunt foarte importante, pentru a se obţine informaţii privind deviatia standard în cadrul unei serii de teste. Coeficientul de variatie trebuie să fie inferior valorii de 30%.(e) Pentru bioteste, trebuie să fie definiţi compusii ţinta, interferentele posibile şi nivelurile maxime tolerabile ale martorului.Abordare cantitativăAbordarea cantitativă necesita serii de dilutii ale standardului, curatare şi măsurare dubla sau tripla, precum şi controale de recuperare şi ale martorului. Rezultatul poate fi exprimat ca TEQ, prin acesta se presupune ca, în fapt, compusii responsabili de semnal sunt conformi cu principiul TEQ. Aceasta poate fi efectuată prin utilizarea TCDD (sau a unui amestec standard de dioxina/furan), pentru a se elabora o curba de etalonare în vederea calculării valorii nivelului TEQ din extract şi în consecinţa din proba. Prin urmare, aceasta este corectată pentru nivelul TEQ calculat pentru o proba martor (pentru a se tine cont de impuritatile din solventi şi substantele chimice utilizate) şi pentru recuperare (calculată pornind de la nivelul TEQ într-o proba de control de calitate apropiată de nivelul de interes (limita). Este esenţial a se nota ca o parte a recuperării pierderii aparente poate fi datorată efectelor matricei şi/sau diferenţelor între valorile TEF în bioteste şi valorile TEF oficiale, stabilite de OMS.7.2. Cerinţe pentru metode de analiza utilizate pentru screening(a) Metodele de analiza GC/MS şi biotestele pot fi utilizate pentru screening. Cerinţele stabilite la punctul 6 trebuie să fie utilizate pentru metodele GC/MS. La punctul 7.3 sunt stabilite cerinţe specifice pentru bioteste celulare, iar la punctul 7.4 cerinţe pentru bioteste realizate cu ajutorul kiturilor.(b) Trebuie să fie furnizate informaţii privind numărul de rezultate fals pozitive şi fals negative ale unui set mare de probe, peste sau sub nivelul maxim sau nivelul de lucru, în comparatie cu valoarea TEQ determinata printr-o metoda analitica de confirmare. Ratele de probe fals negative actuale trebuie să fie sub 1%. Rata de probe fals pozitive trebuie să fie suficient de mica, pentru a face o metoda avantajoasă, ca instrument de screening.(c) Rezultatele pozitive trebuie să fie întotdeauna confirmate printr-o metoda de analiza (HRGC/HRMS). În plus, probe dintr-o gama larga de TEQ trebuie să fie confirmate prin HRGC/HRMS (aproximativ 2%-10% din probele negative). Trebuie să fie furnizate informaţii privind corespondenta între biotest şi rezultatele HRGC/HRMS.7.3. Cerinţe specifice pentru bioteste celulare(a) Când se executa un biotest, fiecare testare necesita o serie de concentratii de referinţa ale TCDD sau ale unui amestec de dioxina/furan (curba de răspuns cu un R2 > 0,95 pentru o doza completa). Totuşi, pentru scopuri de screening poate fi utilizata o curba de nivel scăzut extinsă, pentru analizarea de probe de analiza cu nivel scăzut.(b) Pentru rezultatul biotestului, trebuie să fie utilizata o concentraţie TCDD de referinţa (aproximativ de 3x limita de cuantificare) într-un interval de timp constant. O alternativa poate fi răspunsul relativ al unei probe de referinţa în comparatie cu curba de etalonare TCDD, deoarece răspunsul celulelor poate depinde de mai mulţi factori.(c) Graficele de control al calităţii (QC) pentru fiecare tip de material de referinţa trebuie să fie înregistrate şi verificate, pentru a se garanta ca rezultatul este în conformitate cu liniile directoare stabilite.(d) Realizarea dilutiei probei utilizate trebuie să fie situata în cadrul porţiunii liniare a curbei de răspuns, în special pentru calcularile cantitative. Probele ce sunt situate deasupra acestei porţiuni liniare a curbei de răspuns, trebuie să fie diluate şi retestate. Totuşi, se recomanda să fie testate periodic, cel puţin trei sau mai multe dilutii.(e) Procentul deviatiei standard nu trebuie să depăşească 15% într-o tripla determinare pentru fiecare dilutie a probei şi sa nu depăşească 30% pentru trei experimente independente.(f) Limita de detectie poate fi stabilită ca de trei ori valoarea deviatiei standard a solventului martor sau a răspunsului de fond. Alta abordare este de a aplica un răspuns ce este superior celui de fond (factor de inductie de 5x martorul solventului), calculat pe curba de etalonare a zilei. Limita de cuantificare poate fi stabilită ca o valoare de la 5x la 6x deviatia standard a martorului solventului sau a răspunsului de fond, sau să se aplice un răspuns ce este clar superior răspunsului de fond (factor de inductie de 10x martorul solventului), calculat pe curba de etalonare a zilei.7.4. Cerinţe specifice pentru bioteste pe bază de kituri(a) Pentru prepararea probei şi pentru analize trebuie să fie urmate instrucţiunile fabricantului.(b) Kiturile pentru analize nu trebuie să fie utilizate după data expirării.(c) Nu trebuie să fie utilizate materiale sau componenţi destinaţi pentru alte kituri.(d) Kiturile pentru analize trebuie să fie păstrate în cadrul unui interval specificat de temperatura de depozitare şi utilizate la temperatura de lucru specificată.(e) Limita de detectie pentru imuno-dozari este determinata cu o valoare de 3x deviatia standard bazată pe o serie de 10 analize repetate ale martorului şi care trebuie separate prin valoarea pantei dreptei ecuatiei de regresie liniara.(f) Trebuie să fie utilizate standarde de referinţa pentru teste de laborator, pentru a se asigura ca răspunsul, în ceea ce priveşte standardul, se situeaza într-un interval acceptabil de valori.8. Raportarea rezultatuluiÎn măsura în care procedura analitica utilizata permite, rezultatele analitice trebuie să conţină niveluri individuale ale congenerilor PCDD/F şi PCB şi trebuie să fie raportate ca limita inferioară, limita superioară şi limita medie, pentru a se include un maxim de informaţii în raportarea rezultatelor şi astfel să se permită interpretarea rezultatelor în conformitate cu cerinţele specifice.Raportarea trebuie, de asemenea, sa includă conţinutul în lipide al probei, precum şi metoda utilizata pentru extractia lipidelor.Trebuie să fie disponibile informaţii despre recuperarile standardelor interne individuale, în cazul recuperarilor situate în afară intervalului menţionat la punctul 6, în cazul în care nivelul maxim este depăşit precum şi în alte cazuri, la cerere.(1) Nu a fost transmisă încă nici o evidenta a biotestelor pe bază de kituri comerciale disponibile având sensitivitate şi fiabilitate suficienta pentru a fi utilizate pentru screening în vederea detectarii prezentei dioxinelor la nivelele solicitate în probe de alimente şi furaje. … –––
