NORMA SANITARĂ VETERINARA din 11 martie 2002

cu privire la condiţiile de sănătate a animalelor şi certificarea veterinara pentru importul din tari terţe de material seminal provenit de la bovine



 + 
Articolul 1Autoritatea sanitară veterinara centrala a României avizează importul de material seminal provenit de la bovinele care îndeplinesc condiţiile stabilite în certificatele de sănătate a animalelor prevăzute în anexele nr. 1-4. + 
Articolul 2Ţările terţe autorizate sa utilizeze modelul de certificat de sănătate a animalelor prevăzut în anexa nr. 1 sunt: Republica Ceha, Ungaria, Noua Zeelanda, Polonia, România, Elvetia şi Republica Slovaca. + 
Articolul 3Ţara autorizata sa utilizeze modelul de certificat de sănătate a animalelor prevăzut în anexa nr. 2 este Statele Unite ale Americii. + 
Articolul 4Ţara autorizata sa utilizeze modelul de certificat de sănătate a animalelor prevăzut în anexa nr. 3 este Canada, excluzând regiunea vaii Okanagan din Columbia Britanica, care este definită ca zona delimitata de o linie trasata de la un punct aflat pe granita care separa Canada de Statele Unite ale Americii, de 120°15' longitudine, 49° latitudine îndreptată spre nord, către un punct de 119°35' longitudine, 50°30' latitudine, într-o direcţie nord-est către un punct de 119° longitudine, 50°45' latitudine, într-o direcţie sudica spre un punct aflat pe granita care separa Canada de Statele Unite ale Americii, de 118°15' longitudine şi 49° latitudine. + 
Articolul 3Ţara autorizata sa utilizeze modelul de certificat de sănătate a animalelor prevăzut în anexa nr. 4 este Australia. + 
Articolul 4Testarea bovinelor pentru febra catarala şi pentru boala hemoragica epizootica se va efectua conform protocoalelor prevăzute în anexa nr. 5. + 
Articolul 5Anexele nr. 1-5 fac parte integrantă din prezenta norma sanitară veterinara. + 
Anexa 1    ────────la norma sanitară veterinara─────────────────────────────                      CERTIFICAT DE SĂNĂTATE A ANIMALELOR           pentru importul de material seminal provenit de la bovine┌──────────────────────────────────────────┬───────────────────────────────────┐│1. Expeditor (numele şi adresa completa) │ Numărul certificatului │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│ │2. Ţara terta a colectării │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│3. Destinatar (numele şi adresa completa) │4. Autoritatea sanitară veterinara ││ │ competenţa │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│ │5. Autoritatea sanitară veterinara ││ │ competenţa locală │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│6. Locul încărcării │7. Numele şi adresa centrului de ││ │ colectare a materialului seminal│├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│8. Mijlocul de transport │11. Numărul de autorizare a │├──────────────────────────────────────────┤ centrului de colectare a ││9. Locul şi ţara de destinaţie │ materialului seminal │├──────────────────────────────────────────┤ ││10. Numărul sigiliului containerelor cu │ ││ material seminal │ │├──────────────────────────────────────────┤ ││12. Identificarea materialului seminal │ ││ proaspăt sau congelat*) │ │├─────────────────────────┬────────────────┴───────────┬───────────────────────┤│a) Numărul de doze │b) Data (datele) colectării │ c) Rasa │├─────────────────────────┤ ├───────────────────────┤│d) Identificarea │ │ ││ animalului donator │ │ │└─────────────────────────┴────────────────────────────┴───────────────────────┘ *) A se anula, după caz.13. Subsemnatul ……., medic veterinar oficial, am citit şi imi este cunoscută Directiva Consiliului 88/407/CEE şi certific ca:a) ………(denumirea tarii exportatoare)…… a fost indemna de pesta bovina şi febra aftoasa pe o perioadă de 12 luni înainte de colectarea materialului seminal pentru export şi până la data de expediere a sa, în cursul aceleiaşi perioade nu s-a efectuat nici o vaccinare împotriva acestor boli; … b) centrul de colectare a materialului seminal în care a fost colectat materialul seminal ce urmează să fie exportat a fost: … (i) autorizat conform condiţiilor stabilite în cap. I din anexa A la Directiva Consiliului 88/407/CEE ;(îi) condus şi supravegheat conform condiţiilor stabilite în cap. II din anexa A la Directiva Consiliului 88/407/CEE ;(iii) indemn de rabie, tuberculoza, bruceloza, antrax şi pleuropneumonia contagioasa bovina pe o perioadă de 30 de zile înainte de data colectării materialului seminal ce trebuie exportat şi de 30 de zile după data colectării (în cazul materialului seminal proaspăt până în ziua expedierii);c) bovinele care se găsesc la centrul de colectare a materialului seminal: … (i) provin din efective şi/sau au fost fatate de mame care îndeplinesc condiţiile prevăzute la cap. I din anexa B la Directiva 88/407/CEE ;(îi) au fost supuse, înainte de a intră în izolare, testelor solicitate conform cap. I din anexa B la Directiva 88/407/CEE ;(iii) au respectat cerinţele de izolare înainte de intrare şi pe cele de testare stabilite conform cap. I din anexa B la Directiva 88/407/CEE ;(iv) au fost ţinute cel puţin un an şi au fost supuse testelor de rutina conform cap. II din anexa B la Directiva 88/407/CEE ;(d) materialul seminal ce trebuie exportat:(i) a fost obţinut de la donatori care au fost ţinuţi în ………(denumirea tarii exportatoare)………. o perioadă de 6 luni înainte de colectarea materialului seminal pentru export şi care satisfac condiţiile stabilite în anexa C la Directiva 88/407/CEE ;(îi) a fost obţinut de la donatori care:1. se găsesc într-un centru de colectare a materialului seminal în care toate bovinele, în cursul a 12 luni înainte de colectarea materialului seminal pentru export, au fost supuse, cu rezultate negative, unui test de seroneutralizare sau unui test Elisa pentru rinotraheita infectioasa bovina/vulvovaginita pustuloasa infectioasa*1); sau────────────*1) Se anulează, după caz.2. au reactionat negativ la un test de seroneutralizare sau la un test Elisa pentru rinotraheita infectioasa bovina/vulvovaginita pustuloasa infectioasa, efectuat într-o perioadă de 12 luni înainte de colectarea materialului seminal pentru export; sau3. sunt seropozitivi, fiind vaccinati în concordanta cu cap. II din anexa B la Directiva Consiliului 88/407/CEE şi având un rezultat negativ la un test de seroneutralizare sau la un test Elisa, efectuat înainte de vaccinare în centrul de colectare a materialului seminal aprobat;(iii) a fost prelucrat, depozitat şi transportat în condiţii care îndeplinesc prevederile Directivei 88/407/CEE .Întocmit la …(locul)….., la ….(data)………  ┌───────────┐ Semnatura*1) …………………………………….  │Ştampila*1)│ Numele şi prenumele (cu majuscule) …………………  └───────────┘ Titlul oficial …………………………………..────────────*1) Semnatura şi ştampila trebuie să fie de o culoare diferita de cea a tipariturii. + 
Anexa 2    ────────la norma sanitară veterinara────────────────────────────                      CERTIFICAT DE SĂNĂTATE A ANIMALELOR          pentru importul de material seminal provenit de la bovine din                        Statele Unite ale Americii┌──────────────────────────────────────────┬───────────────────────────────────┐│1. Expeditor (numele şi adresa completa) │ Numărul certificatului │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│ │2. Ţara terta a colectării │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│3. Destinatar (numele şi adresa completa) │4. Autoritatea sanitară veterinara ││ │ competenţa │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│ │5. Autoritatea sanitară veterinara ││ │ competenţa locală │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│6. Locul încărcării │7. Numele şi adresa centrului de ││ │ colectare a materialului seminal│├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│8. Mijlocul de transport │11. Numărul de autorizare a │├──────────────────────────────────────────┤ centrului de colectare a ││9. Locul şi ţara de destinaţie │ materialului seminal │├──────────────────────────────────────────┤ ││10. Numărul sigiliului containerelor cu │ ││ material seminal │ │├──────────────────────────────────────────┤ ││12. Identificarea materialului seminal │ ││ proaspăt sau congelat*) │ │├─────────────────────────┬────────────────┴───────────┬───────────────────────┤│a) Numărul de doze │b) Data (datele) colectării │ c) Rasa │├─────────────────────────┤ ├───────────────────────┤│d) Identificarea │ │ ││ animalului donator │ │ │└─────────────────────────┴────────────────────────────┴───────────────────────┘ *) A se anula, după caz.13. Subsemnatul …………, medic veterinar oficial, am citit şi imi sunt cunoscute prevederile Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001, publicat în Monitorul Oficial al României, Partea I, nr. 111 din 11 februarie 2002, şi certific ca:a) ……./(denumirea tarii exportatoare) …….. a fost indemna de pesta bovina şi febra aftoasa într-o perioadă de 12 luni imediat înainte de colectarea materialului seminal pentru export şi până la data de expediere a sa şi în cursul aceleiaşi perioade nu s-a efectuat nici o vaccinare împotriva acestor boli; … b) centrul de colectare a materialului seminal în care a fost colectat materialul seminal ce urmează să fie exportat a fost: … (i) autorizat conform prevederilor Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(îi) condus şi supravegheat conform prevederilor Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iii) indemn de rabie, tuberculoza, bruceloza, antrax şi pleuropneumonia contagioasa bovina pe o perioadă de 30 de zile înainte de data colectării materialului seminal ce trebuie exportat şi de 30 de zile după colectare (în cazul materialului seminal proaspăt până în ziua expedierii);c) bovinele care se găsesc la centrul de colectare a materialului seminal: … (i) provin din efective şi/sau au fost fatate de mame care îndeplinesc condiţiile prevăzute de Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(îi) au fost supuse, înainte de a intră în izolare, testelor prevăzute în Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iii) au respectat cerinţele de izolare înainte de intrare şi pe cele de testare stabilite în Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iv) au fost ţinute cel puţin un an şi au fost supuse testelor de rutina conform Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;d) materialul seminal ce trebuie exportat: … (i) a fost obţinut de la donatori care au fost ţinuţi în ……../(denumirea tarii exportatoare)……… o perioadă de 6 luni imediat înainte de colectarea materialului seminal pentru export, şi care îndeplinesc condiţiile prevăzute în Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(îi) a fost obţinut de la donatori care:1. se găsesc într-un centru de colectare a materialului seminal în care toate bovinele, în cursul a 12 luni înainte de colectarea materialului seminal pentru export, au fost supuse, cu rezultate negative, unui test de seroneutralizare sau unui test Elisa pentru rinotraheita infectioasa bovina/vulvovaginita pustuloasa infectioasa*1); sau──────────*1) Se anulează, după caz.2. reactioneaza negativ la un test de seroneutralizare sau un test Elisa pentru rinotraheita infectioasa bovina/vulvovaginita pustuloasa infectioasa, efectuat într-o perioadă de 12 luni înainte de colectarea materialului seminal pentru export; sau3. sunt seropozitivi, fiind vaccinati conform Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001 şi având un rezultat negativ la un test de seroneutralizare sau la un test Elisa, efectuat înainte de vaccinare în centrul de colectare a materialului seminal aprobat;(iii) a fost prelucrat, depozitat şi transportat conform Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iv) a fost obţinut de la tauri donatori care au fost supuşi de doua ori, la interval de cel mult 12 luni, înainte şi după colectare, la următoarele teste, cu rezultate negative, într-un laborator autorizat (testarea după colectare trebuie să fie efectuată pe o proba de sânge prelevata cu nu mai puţin de 21 de zile după colectarea materialului seminal pentru export):1. un test Elisa competitiv pentru febra catarala, conform anexei nr. 5 la prezenta norma sanitară veterinara;2. un test de imunodifuzie în gel de agar conform anexei nr. 5 la prezenta norma sanitară veterinara şi un test de neutralizare pentru toate serotipurile virusului bolii hemoragice epizootice cunoscute ca existând în ţara exportatoare.Întocmit la …(locul)….., la ….(data)………  ┌───────────┐ Semnatura*1) …………………………………….  │Ştampila*1)│ Numele şi prenumele (cu majuscule) …………………  └───────────┘ Titlul oficial …………………………………..────────────*1) Semnatura şi ştampila trebuie să fie de o culoare diferita de cea a tipariturii. + 
Anexa 3    ────────la norma sanitară veterinara────────────────────────────                    CERTIFICAT DE SĂNĂTATE A ANIMALELOR         pentru importul de material seminal provenit de la bovine┌──────────────────────────────────────────┬───────────────────────────────────┐│1. Expeditor (numele şi adresa completa) │ Numărul certificatului │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│ │2. Ţara terta a colectării │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│3. Destinatar (numele şi adresa completa) │4. Autoritatea sanitară veterinara ││ │ competenţa │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│ │5. Autoritatea sanitară veterinara ││ │ competenţa locală │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│6. Locul încărcării │7. Numele şi adresa centrului de ││ │ colectare a materialului seminal│├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│8. Mijlocul de transport │11. Numărul de autorizare a │├──────────────────────────────────────────┤ centrului de colectare a ││9. Locul şi statul membru de destinaţie │ materialului seminal │├──────────────────────────────────────────┤ ││10. Numărul sigiliului containerelor cu │ ││ material seminal │ │├──────────────────────────────────────────┤ ││12. Identificarea materialului seminal │ ││ proaspăt sau congelat*) │ │├─────────────────────────┬────────────────┴───────────┬───────────────────────┤│a) Numărul de doze │b) Data (datele) colectării │ c) Rasa │├─────────────────────────┤ ├───────────────────────┤│d) Identificarea │ │ ││ animalului donator │ │ │└─────────────────────────┴────────────────────────────┴───────────────────────┘ *) A se anula, după caz13. Subsemnatul ……., medic veterinar oficial, am citit şi imi sunt cunoscute prevederile Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001, publicat în Monitorul Oficial al României, Partea I, nr. 111 din 11 februarie 2002, şi certific ca:a) ……./(denumirea tarii exportatoare)…… a fost indemna de pesta bovina şi febra aftoasa într-o perioadă de 12 luni imediat înainte de colectarea materialului seminal pentru export şi până la data de expediere a sa şi în cursul aceleiaşi perioade nu s-a efectuat nici o vaccinare împotriva acestor boli; … b) centrul de colectare a materialului seminal în care a fost colectat materialul seminal ce urmează să fie exportat a fost; … (i) autorizat conform Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(îi) condus şi supravegheat conform Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iii) indemn de rabie, tuberculoza, bruceloza, antrax şi pleuropneumonia contagioasa bovina o perioadă de 30 de zile înainte de data de colectare a materialului seminal ce trebuie exportat şi de 30 de zile după colectare (în cazul materialului seminal proaspăt până în ziua expedierii);c) bovinele care se găsesc la centrul de colectare a materialului seminal: … (i) provin din efective şi/sau au fost fatate de mame care îndeplinesc condiţiile prevăzute în Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(îi) au fost supuse, înainte de a intră în izolare, testelor prevăzute în Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iii) au respectat cerinţele de izolare înainte de intrare şi pe cele de testare prevăzute în Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iv) au fost ţinute pentru cel puţin un an, au fost supuse testelor de rutina, conform Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001 şi cap. II din anexa B la Directiva 88/407/CEE ;d) materialul seminal ce trebuie exportat: … (i) a fost obţinut de la donatori care au fost ţinuţi în ………/(denumirea tarii exportatoare)…… o perioadă de 6 luni imediat înainte de colectarea materialului seminal pentru export şi care îndeplinesc condiţiile prevăzute în Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(îi) a fost obţinut de la donatori care:1. se găsesc într-un centru de colectare a materialului seminal în care toate bovinele, în cursul a 12 luni înainte de colectarea materialului seminal pentru export, au fost supuse, cu rezultate negative, unui test de seroneutralizare sau unui test Elisa pentru rinotraheita infectioasa bovina/vulvovaginita pustuloasa infectioasa*1); sau2. au reactionat negativ la un test de seroneutralizare sau la un test Elisa pentru rinotraheita infectioasa bovina/vulvovaginita pustuloasa infectioasa, efectuat într-o perioadă de 12 luni înainte de colectarea materialului seminal pentru export; sau3. sunt seropozitivi, fiind vaccinati conform Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001, având un rezultat negativ la un test de seroneutralizare sau la un test Elisa, efectuat înainte de vaccinare, în centrul de colectare a materialului seminal aprobat;(iii) a fost prelucrat, depozitat şi transportat conform Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iv) a fost obţinut de la tauri donatori care, fie:1. se găseau în centrul autorizat de colectare a materialului seminal la data de 1 iulie 1994; fie2. au fost introdusi în centrul autorizat după data de 1 iulie 1994, fiind supuşi, cu rezultate negative, următoarelor teste pentru febra catarala şi boala hemoragica epizootica, într-un laborator autorizat, înainte de a intră în centru şi în orice caz au fost supuşi semestrial, cu rezultate negative, următoarelor teste, într-un laborator autorizat:– test Elisa competitiv pentru febra catarala conform anexei nr. 5 la prezenta norma sanitară veterinara;– test de imunodifuzie în gel de agar, conform anexei nr. 5 la prezenta norma sanitară veterinara şi test de neutralizare pentru toate serotipurile virusului bolii hemoragice epizootice găsite în ţara exportatoare.Întocmit la …(locul)….., la ….(data)………  ┌───────────┐ Semnatura*2) …………………………………….  │Ştampila*2)│ Numele şi prenumele (cu majuscule) …………………  └───────────┘ Titlul oficial …………………………………..────────────*1) Se anulează, după caz.*2) Semnatura şi ştampila trebuie să fie de o culoare diferita de cea a tipariturii. + 
Anexa 4    ────────la norma sanitară veterinara────────────────────────────                   CERTIFICAT DE SĂNĂTATE A ANIMALELOR             pentru importul de material seminal provenit de la bovine┌──────────────────────────────────────────┬───────────────────────────────────┐│1. Expeditor (numele şi adresa completa) │ Numărul certificatului │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│ │2. Ţara terta a colectării │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│3. Destinatar (numele şi adresa completa) │4. Autoritatea sanitară veterinara ││ │ competenţa │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│ │5. Autoritatea sanitară veterinara ││ │ competenţa locală │├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│6. Locul încărcării │7. Numele şi adresa centrului de ││ │ colectare a materialului seminal│├──────────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤│8. Mijlocul de transport │11. Numărul de autorizare a │├──────────────────────────────────────────┤ centrului de colectare a ││9. Locul şi statul membru de destinaţie │ materialului seminal │├──────────────────────────────────────────┤ ││10. Numărul sigiliului containerelor cu │ ││ material seminal │ │├──────────────────────────────────────────┤ ││12. Identificarea materialului seminal │ ││ proaspăt sau congelat*) │ │├─────────────────────────┬────────────────┴───────────┬───────────────────────┤│a) Numărul de doze │b) Data (datele) colectării │ c) Rasa │├─────────────────────────┤ ├───────────────────────┤│d) Identificarea │ │ ││ animalului donator │ │ │└─────────────────────────┴────────────────────────────┴───────────────────────┘     *) A se anula, după caz.13. Subsemnatul, …….., medic veterinar oficial, am citit şi imi sunt cunoscute prevederile Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001 şi certific ca:a) ……../(denumirea tarii exportatoare)…. a fost indemna de pesta bovina şi febra aftoasa într-o perioadă de 12 luni imediat înainte de colectarea materialului seminal pentru export şi până la data de expediere a sa şi în cursul aceleiaşi perioade nu s-a efectuat nici o vaccinare împotriva acestor boli; … b) centrul de colectare a materialului seminal în care a fost colectat materialul seminal ce urmează să fie exportat a fost: … (i) autorizat conform prevederilor Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(îi) condus şi supravegheat conform prevederilor Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iii) indemn de rabie, tuberculoza, bruceloza, antrax şi pleuropneumonia contagioasa bovina o perioadă de 30 de zile înainte de data colectării materialului seminal ce trebuie exportat şi de 30 de zile după colectare (în cazul materialului seminal proaspăt până în ziua expedierii);c) bovinele care se găsesc la centrul de colectare a materialului seminal: … (i) provin din efective şi/sau au fost fatate de mame care îndeplinesc condiţiile prevăzute în Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(îi) au fost supuse, înainte de a intră în izolare, testelor prevăzute în Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iii) au respectat cerinţele de izolare înainte de intrare şi pe cele de testare, prevăzute în Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iv) au fost ţinute cel puţin un an şi au fost supuse testelor de rutina, conform Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;d) materialul seminal ce trebuie exportat: … (i) a fost obţinut de la donatori care au fost ţinuţi în ……./(denumirea tarii exportatoare)…. o perioadă de 6 luni imediat înainte de colectarea materialului seminal pentru export şi care îndeplinesc condiţiile prevăzute în Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(îi) a fost obţinut de la donatori care:1. se găsesc într-un centru de colectare a materialului seminal în care toate bovinele, în cursul a 12 luni înainte de colectarea materialului seminal pentru export, au fost supuse, cu rezultate negative, unui test de seroneutralizare sau unui test Elisa pentru rinotraheita infectioasa bovina/vulvovaginita pustuloasa infectioasa*1); sau2. au reactionat negativ la un test de seroneutralizare sau la un test Elisa pentru rinotraheita infectioasa bovina/vulvovaginita pustuloasa infectioasa, efectuat pe perioada a 12 luni înainte de colectarea materialului seminal pentru export; sau3. sunt seropozitivi, fiind vaccinati, conform Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001, având rezultat negativ la un test de seroneutralizare sau la un test Elisa, efectuat în centrul aprobat de colectare a materialului seminal înainte de vaccinare;(iii) a fost prelucrat, depozitat şi transportat conform Ordinului ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 353/2001;(iv) a fost obţinut de la tauri donatori care au fost supuşi de doua ori, la interval de cel mult 12 luni, înainte şi după colectare, la următoarele teste, cu rezultate negative, într-un laborator autorizat (testul în urma colectării trebuie să fie efectuat pe o proba de sânge prelevata cu nu mai puţin de 21 de zile după colectarea materialului seminal pentru export):1. un test Elisa competitiv pentru febra catarala, conform anexei nr. 5 la prezenta norma sanitară veterinara;2. un test de imunodifuzie în gel de agar, conform anexei nr. 5 la prezenta norma sanitară veterinara şi un test de neutralizare pentru toate serotipurile virusului bolii hemoragice epizootice cunoscute ca existând în ţara exportatoare.3. un test seroneutralizare pentru virusul Akabane.Întocmit la ……/(locul)……, la …/(data)…..   ┌───────────┐ Semnatura*2) ………………………………   │Ştampila*2)│ Numele şi prenumele (cu majuscule) …………..   └───────────┘ Titlul oficial …………………………….──────────────*1) Se anulează, după caz.* 2) Semnatura şi ştampila trebuie să fie de o culoare diferita de cea a tipariturii. + 
Anexa 5────────la norma sanitară veterinara──────────────────PROTOCOLpentru un test Elisa competitiv "test de imunoabsorbtie cu legătură enzimatica", test utilizând anticorpi monoclonali specifici de grup pentru detectarea anticorpilor virusului febrei cataraleTest competitiv Elisa pentru febra catarala, utilizând anticorpul monoclonal 3-17-A3Testul este capabil sa detecteze anticorpi faţă de toate serotipurile cunoscute ale virusului febrei catarale "VFC".Principiul testului este întreruperea reacţiei dintre antigenul VFC şi un anticorp monoclonal specific de grup "3-17-A3" prin adăugarea de dilutii ale serului de testat. Anticorpii VFC prezenţi în serul de testat blocheaza reactivitatea anticorpului monoclonal "AcM" şi rezultă o atenuare a schimbării asteptate a culorii în momentul adaugarii substratului enzimatic.Materiale şi reagenti1. Plăci de microtitrare cu fund plat2. Antigen: preparat în modul descris mai jos3. Tampon de blocare: lapte praf deshidratat "Marvel" 5% "w/v", Tween-20 0,1% "v/v" "furnizat ca soluţie de polioxietilena sorbiton monolaurat" în soluţie salina tamponata – fosfat "PBS"4. Anticorp monoclonal 3-17-A3 "furnizat ca supernatant de cultura tisulara hibridoma" depozitat la temperatura de -20°C sau liofilizat, diluat 1/50, cu tampon de blocare înainte de utilizare, dirijat contra polipeptidei p7 specifică de grup5. Conjugat: globulina de iepure antisoarece "absorbită şi eluata", conjugata cu peroxidaza de hrean şi păstrată la intuneric la temperatura de 4°C6. Substrat şi cromogen: 0,2 g de ortofenilen-diamina "OFD" dizolvată într-un tampon constând în 2,553 g acid citric şi 4,574 g di-sodium hidrogenortofosfat adus la 500 ml cu apa distilata, împărţită în cote-părţi de 25 ml şi păstrată la intuneric la temperatura de -20°C, cu 12 f2æl/25 ml de peroxid de hidrogen "30% w/v" adăugat imediat înainte de utilizareA se manipula OFD cu precautii – a se purta manusi din cauciuc – suspect de a fi mutagen7. Acid sulfuric 1 M: 26,6 ml de acid adăugat la 474,4 ml apa distilataAtenţie – Întotdeauna se adauga acid în apa, niciodată apa în acid8. Agitator orbital9. Cititor de plăci Elisa – testul poate fi citit vizualProtocol de testare

Protocol de testareControlul martoruluiRândul 1A-H reprezintă un control al martorului constând în antigen VFC şi conjugat. Acesta poate fi utilizat pentru a etalona cititorul Elisa.Controlul AcMRândul 2A-H reprezintă controlul anticorpului monoclonal şi consta în antigen VFC, anticorp monoclonal şi conjugat. Acesta reprezintă un control negativ. Media citirilor densitatilor optice pentru acest rând de control reprezintă valoarea de inhibitie 0%.Controlul pozitivRândul 3A-H reprezintă controlul pozitiv. Acesta consta în antigen VFC, dilutii ale antiserului pozitiv VFC, AcM şi conjugat. Acesta este inclus ca un indicator al faptului ca testul funcţionează corespunzător şi ca de la test la test trebuie să fie obţinute niveluri similare de inhibitie.Seruri de testatÎn schema de testare prezentată mai sus pot fi testate 18 seruri la o rata a dilutiei de 1/2, 1/4, 1/8, 1/16. Aceasta va da unele indicaţii asupra titrului de anticorpi în serul de testat. Aceasta gama de dilutii poate fi extinsă ulterior pentru a se obţine titruri finale ale dilutiei serului. În mod alternativ, pentru studiile serologice la scara mare, serurile pot fi testate la o dilutie unica de 1/4 sau la doua dilutii de 1/2 şi 1/4 ca un test de control rapid.Procedura1. Se dilueaza antigenul VFC cu concentraţie pretitrata în PBS, se agita pentru scurt timp folosindu-se baia de ultrasunete pentru a dispersa virusul agregat, iar "dacă baia de ultrasunete nu este disponibilă, se pipeteaza viguros" şi se adauga 50 f2æl în toate godeurile placii Elisa. Se lovesc uşor marginile placii pentru a dispersa antigenul.2. Se incubeaza la temperatura de 37°C timp de 60 de minute într-un agitator orbital. Se spala plăcile de trei ori prin umplerea şi golirea godeurilor cu PBS nesteril şi se usucă cu hârtie absorbanta.3. Se adauga 50 f2æl de tampon de blocare pentru fiecare godeu. Se adauga serurile de testat şi serul pozitiv în godeurile corespunzătoare şi se dilueaza pe suprafaţa placii utilizându-se o pipeta cu canale multiple. Nu se adauga ser în cazul controlului cu blanc sau controlului AcM.4. Imediat după adăugarea serurilor de testat se dilueaza AcM în tamponul de blocare "cu dilutie pretitrata" şi se adauga 50 ml în toate godeurile placii, cu excepţia controlului cu blanc.5. Se incubeaza la temperatura de 37°C timp de 60 de minute într-un agitator orbital. Se spala de trei ori cu PBS şi se usucă.6. Se dilueaza concentratul de globuline de iepure antisoarece la 1/5000 în tampon de blocare şi se adauga 50 f2æl în toate godeurile placii.7. Se incubeaza la temperatura de 37°C timp de 60 de minute într-un agitator orbital. Se spala de trei ori cu PBS şi se usucă.8. Se dezgheata OPD şi imediat înainte de utilizare se adauga 12 f2æl din peroxid de hidrogen 30% la fiecare 25 ml de OPD. Se adauga 50 ml în toate godeurile placii. Se asteapta aproximativ 10 minute pentru a se modifica culoarea şi se opreşte reactia cu acid sulfuric 1M "50 f2æl/godeu". Culoarea trebuie să se modifice în godeurile de control al AcM şi în acele godeuri care conţin seruri fără nici un anticorp VFC.9. Se examinează şi se înregistrează plăcile fie vizual, fie utilizându-se un cititor spectrofotometric.Analiza rezultatelorSe calculează media citirilor densitatilor optice "DO" plecandu-se de la controalele AcM. Aceasta reprezintă valoarea de inhibitie 0%. Citirile densitatii optice ale serurilor de testat sunt exprimate ca valori procentuale de inhibitie, utilizându-se următoarea formula:  Valoarea procentuală = 100 – DO în prezenta serului de testat      de inhibitie ──────────────────────────────── x 100                                DO în absenta serului de testatValorile de inhibitie mai mari de 40% la o dilutie a serului de 1/4 sunt considerate pozitive. Citirea vizuala este posibila dacă o inhibitie de 40% este cea mai mica valoare uşor vizibila cu ochiul liber.Prepararea antigenului VFC pentru tehnica Elisa1. Se spala de 3 ori 10 plăci de celule confluente BHK-21 cu mediul Eagle's fără ser şi se infecteaza cu serotipul 1 al virusului febrei catarale într-un mediu Eagle's fără ser.2. Se incubeaza la temperatura de 37°C şi se examinează zilnic pentru efectul citopatic "ecp".3. Atunci când ecp este evident pe 80-90% din stratul de celule al fiecărei plăci, se recuperează virusul prin agitarea celulelor aderente de sticlă.4. Se centrifugheaza la 2.000-3.000 rot./min. pentru a precipita celulele.5. Se inlatura supernatantul şi se resuspenda celulele în aproximativ 30 ml de PBS conţinând 1% "Sarkosyl" şi 2 ml de fluorura de fenilmetilsulfonil "tampon de liza".Aceasta poate determina celulele sa formeze un gel şi se pot adauga mai multe tampoane de liza pentru a reduce acest efect.NOTĂ:Fluorura de fenilmetilsulfonil este dăunătoare – a se manipula cu prudenta extrema!6. Se fragmenteaza celulele timp de 60 de secunde, folosindu-se o sonda ultrasonica la o amplitudine de 30 de microni.7. Se centrifugheaza la 10.000 rot./min. timp de 10 minute.8. Se depozitează supernatantul la temperatura de +4°C şi se resuspenda celulele precipitate rămase în 10-20 ml de tampon de liza.9. Se agita cu ajutorul unui aparat cu ultrasunete şi se clarifica, depozitand supernatantul în fiecare etapa, în total de 3 ori.10. Se reunesc supernatantii şi se centrifugheaza la 24.000 rot./min. timp de 120 de minute la temperatura de 4°C pe un tampon de 5 ml de sucroza 40% "w/v în PBS", folosindu-se tuburi de centrifugare Beckmann de 30 ml şi un rotor SW 28.11. Se inlatura supernatantul, se dreneaza tuburile în întregime şi se resuspenda granula de reziduu celular în PBS prin supunerea la ultrasunete. Se depozitează antigenul în cote-părţi la -70°C.Titrarea antigenului VFC pentru tehnica ElisaAntigenul febrei catarale este titrat prin tehnica Elisa indirecta. Dilutii în baza doi de antigen sunt titrate faţă de o dilutie constanta "1/50" de anticorpi monoclonali 3-17-A3.Protocolul este după cum urmează:Procedura1. Se dilueaza antigen VFC în PBS de-a lungul placii de microtitrare în serii de dilutii, în baza doi "50 f2æl/godeu", utilizându-se o pipeta cu canale multiple.2. Se incubeaza timp de o ora la temperatura de 37°C într-un agitator orbital.3. Se spala plăcile de trei ori cu PBS.4. Se adauga 50 ml din anticorpul monoclonal 3-17-A3 "diluat 1/50" în fiecare godeu al placii de microtitrare.5. Se incubeaza timp de o ora la temperatura de 37°C într-un agitator orbital.6. Se spala plăcile de trei ori cu PBS.7. Se adauga în fiecare godeu al placii de microtitrare 50 f2æl de globulina de iepure antisoarece conjugata la peroxidaza de hrean, diluata până la o concentraţie optima pretitrata.8. Se incubeaza o ora la temperatura de 37°C într-un agitator orbital.9. Se adauga substrat şi cromogen după cum s-a descris anterior. Se opreşte reactia după 10 minute, prin adăugarea de acid sulfuric 1 M "50 f2æl/godeu".În testul concurent anticorpul monoclonal trebuie să fie în exces, de aceea se alege o dilutie de antigen care cade pe curba de titrare "nu pe zona platou", care da aproximativ 0,8 DO după 10 minute.Protocolul pentru testul de imunodifuzie pe gel de agar pentru detectarea anticorpilor bolii hemoragice epizooticeTestul de imunodifuzie pe gel de agar este efectuat în concordanta cu următorul protocol:Materiale şi reactivi1. Antigen──────────Antigenul care precipita este preparat în orice sistem de cultura celulara care susţine multiplicarea rapida a serotipului "serotipurilor" virale corespunzătoare ale virusului bolii hemoragice epizootice. Sunt recomandate celulele BKH sau celulele Vero. Antigenul este prezent în fluidul supernatant la finalul creşterii virusului, dar pentru a fi eficient necesita o concentrare de la 50 până la 100 de ori. Aceasta poate fi realizată prin orice procedura standard de concentrare a proteinelor; virusul antigenului poate fi inactivat prin adăugarea de betapropiolactona 0,3% "v/v".2. Serul de control pozitiv cunoscut────────────────────────────────────Utilizându-se serul internaţional de referinţa şi antigenul, este produs un ser standard naţional, standardizat pentru proporţia optima faţă de serul internaţional de referinţa, liofilizat şi utilizat ca ser de control cunoscut în fiecare test.3. Serul de testat──────────────────Procedura1. Agaroza 1% preparata în tampon de borat sau de barbitol de sodiu, pH de la 8,5 la 9,0, este turnata într-o placa Petri de o adancime minima de 3,0 mm.2. Un sablon de testat din 7 godeuri lipsite de umiditate, fiecare cu un diametru de 5,0 mm, este tăiat în agar. Sablonul consta într-un godeu central şi 6 godeuri aranjate în jurul lui într-un cerc cu o raza de 3 mm.

3. Godeul central este umplut cu antigenul standard. Godeurile periferice 2, 4 şi 6 sunt umplute cu ser pozitiv cunoscut, iar godeurile 1, 3 şi 5 sunt umplute cu seruri de testat.4. Sistemul este incubat o perioadă de până la 72 de ore la temperatura camerei, într-o camera umeda închisă.Interpretare────────────Un ser de testat este pozitiv dacă formează o linie de precipitare specifică cu antigenul şi formează o linie completa de identitate cu serul de control. Un ser de testat este negativ dacă nu formează o linie specifică cu antigenul şi nu deviaza curba serului de control. Plăcile Petri trebuie să fie examinate pe fond intunecat şi utilizându-se iluminare indirecta.────────────────────

	Redacția Lex24 Drept la Sursa!
	Articole Urmărește